大腸桿菌培養(yǎng) 需37°恒溫過夜培養(yǎng)

　　大腸桿菌是我們腸道里面的桿菌，這是一種很常見的桿菌，對于我們人體的健康是可謂是一把雙刃劍，在不致病的情況下(正常狀況下)，可認為是互利共生(一般高中階段認為是這種關系);在致病的情況下，可認為是寄生，而致病的話常常容易導致嚴重的腹瀉和敗血癥，那么，大腸桿菌培養(yǎng)是怎么回事?針對這個問題我們來詳細了解吧!

　　大腸桿菌培養(yǎng) 需37°恒溫過夜培養(yǎng)

　　大腸桿菌的培養(yǎng)

　　1. LB培養(yǎng)基配制：

　　(液體培養(yǎng)基)

　　① 取1L的燒杯，加入適量的一蒸水(<1000ml)，稱取胰蛋白胨 10g , 酵母提取物 5g , Nacl 10 g 倒入燒杯中

　?、?加入磁子攪拌，至完全溶解

　?、?用NaoH調PH=7.0，定容至1L

　?、?分裝后高壓蒸汽滅菌

　　(固體培養(yǎng)基)

　　① 在液體培養(yǎng)基的基礎上加入瓊脂糖：1L液體培養(yǎng)基→15g瓊脂糖(用水先溶解) ② 在電爐子上邊加熱邊攪拌至煮沸溶解

　?、?分裝后高壓滅菌

　　注意事項：

　　① 電爐子溫度不要太高，燒杯直接加熱時電爐子上要加石棉網(wǎng)

　　高壓滅菌時，瓶蓋上要插上針頭，防止滅菌時瓶蓋噴出

　　2. 倒平板：

　　培養(yǎng)皿要提前進行滅菌、烘干，在超凈工作臺里，打開酒精燈，在酒精燈的火焰旁進行操作，倒完后做好標記

　　3. 接種(平板劃線分離法)：

　　接種環(huán)挑取大腸桿菌進行接種：圖式：

　　注意：每次劃線前接種環(huán)都要灼燒滅菌，再冷卻。

　　4. 37°恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)：

　　接種好的培養(yǎng)皿正置15分鐘，然后倒置放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)

　　大腸桿菌感受態(tài)的制備及轉化

　　感受態(tài)：細菌處于容易吸收外源DNA的狀態(tài)叫感受態(tài)。

　　轉化：是指質粒DNA或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。 一、制備：步驟

　　從大腸桿菌DH5α的培養(yǎng)平板上挑取一個單菌落接于2mL

　　LB液體培養(yǎng)基的試管中，37℃振蕩培養(yǎng)過夜。

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　　以1%的接種量將以上過夜培養(yǎng)物接種于液體培養(yǎng)基中

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　　37℃振蕩培養(yǎng)2～3h

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　　將菌液轉移到50mL離心管中，冰上放置10min

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　　4000rpm，離心10min回收細胞

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　　倒出培養(yǎng)液，將管倒置1min以便培養(yǎng)液流盡

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　　用冰冷的0.1mol/L CaCl 2 10mL，懸浮沉淀

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　　立即放在冰上保溫30min

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　　4℃，4000rpm，離心10min，回收細胞

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　　用冰冷的0.1mol/L CaCl 2 2mL懸浮細胞(務必放冰上)

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　　分裝細胞，每200μl一份。此細胞為感受態(tài)細胞。

　　二、轉化：步驟：

　　在200μl新鮮配制的感受態(tài)細胞中加入質粒 DNA2μl(≤50ng)，

　　混勻同時做以下對照管

　　(受體菌對照：200μl感受態(tài)細菌+2μl無菌水 質粒對照：200μl 0.1mol/L CaCl 2溶液+2μl質粒)

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　　冰上放置30min

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　　將管放到42℃循環(huán)水浴熱沖擊90s

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　　取出，迅速冰浴2min

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　　每管加800μl LB液體培養(yǎng)基，37℃慢搖復蘇1h

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　　取50μl已轉化的感受態(tài)細胞或對照樣品， 各分別涂在含有或不含有氨芐青霉素的培養(yǎng)皿中

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　　待吸干菌液后，倒置培養(yǎng)皿，于37℃培養(yǎng)過夜

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　　次日在含氨芐青霉素的培養(yǎng)皿上長的菌落即為含有質粒的大腸桿菌(即轉化成功)

　　【溫馨提醒】：對于人體而言，當身體免疫力降低的時候，才比較容易感染到大腸桿菌這一病毒。大腸桿菌必須盡早治療，以免日后給生命健康帶來隱患。